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細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

更新時間:2016-08-17 點擊量:1074

細胞凋亡發生時,內源性核酸內切酶將分解核小體區間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結構,可通過檢測核小體判斷細胞是否經歷凋亡事件。
(一) 原理
細胞凋亡的發生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產生80bp~200bp或其倍數的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結構,可特異性檢測細胞溶解物中的核小體片段。
(二)材料與試劑
.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒,生物標記的小鼠抗組蛋白單克隆抗
體。
2.過氧化物酶(-POD)標記的小鼠抗DNA單克隆抗體
3.鏈霉親合素包被的微孔板
4.DNA-組蛋白復合物,作為陰性對照。
5.ABTS底物
6.溶解緩沖液
7.溫育緩沖液
8.底物緩沖液
(三)樣品
.培養細胞或離體細胞的裂解物細胞裂解步驟:收集細胞,離心后,用200µl溶細胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。
2.培養細胞的上清液
3.血漿(血清)

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