實驗原理

    蛋白質(zhì)分子中所含和殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，使蛋白質(zhì)在280nm波長處有zui大吸收值。在一定濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值（A280）與其含量成正比關(guān)系，可用作定量測定。紫外線吸收法測定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點是迅速，簡便，不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，廣泛應(yīng)用在柱層析分離中蛋白質(zhì)洗脫情況的檢測。此法的缺點是：（）對于測定那些與標準蛋白質(zhì)中和含量差異較大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差；（2）若樣品中核酸等吸收紫外線的物質(zhì)，會出現(xiàn)較大的干擾。不同的蛋白質(zhì)和核酸的紫外線吸收是不同的，即使經(jīng)過校正，測定結(jié)果也還存在一定的誤差。但是可作為初步定量的依據(jù)。該法可測定蛋白范圍應(yīng)在0.~.0mg /mL。ELISA試劑盒

試劑和器材

一、標準和待測蛋白質(zhì)溶液

.標準蛋白溶液

    結(jié)晶牛血清蛋白，預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據(jù)其純度配制成mg/mL蛋白溶液。

2. 待測蛋白質(zhì)溶液

    人血清，使用前稀釋00倍。ELISA試劑盒

二、器材

    試管.5×5cm（×9），試管架，移液管mL（×3）；2mL（×2）；5mL（×2）；分光光度計。

操作方法

一、制作標準曲線

    取8支試管編號，按下表分別向每支試管加入各種試劑，搖勻。選用光程為cm的石英比色杯，在280nm波長處分別測定各管溶液的A280值。以A280值為縱坐標，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

二、樣品測定

    取待測蛋白質(zhì)溶液mL，加入蒸餾水3mL，搖勻，按上述方法在280nm波長處測定光吸收值，并從標準曲線上查出待測蛋白質(zhì)的濃度。

注意事項

    由于各種蛋白質(zhì)含有不同量的和苯，顯色的深淺往往隨不同的蛋白質(zhì)而變化。因而本測定法通常只適用于測定蛋白質(zhì)的相對濃度（相對于標準蛋白質(zhì)）。此外蛋白溶液中存在核酸或核苷酸時也會影響紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量的準確性。ELISA試劑盒