操作方法

．經(jīng)典法

（）將被檢病毒材料0.9ml，加︰5～︰0稀釋的特異性免疫血清0.ml充分混合。

（2）置37℃作用h或37℃h后再置4℃過夜。ELISA試劑盒

（3）以7 000r/min～23 000r/min離心90min。

（4）吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。

（5）沉淀物中加少量H2O混懸，用3%磷鎢酸(pH6.0)負(fù)染20Sec～30Sec，滴加于400目銅網(wǎng)Fomnvar膜上，用濾紙從銅網(wǎng)邊緣輕輕吸去多余的負(fù)染液。

（6）在透射電鏡下4×04倍觀察。

2．快速法(瓊脂擴(kuò)散法)

（）同經(jīng)典法()、(2)步驟，制備免疫復(fù)合物。ELISA試劑盒

（2）以生理鹽水或pH 7.2緩沖液制備%瓊脂糖，趁熱澆注于潔凈的載玻片上，每片3ml，待冷卻凝固后，在凝膠面上等距離放置直徑4mm玻璃珠數(shù)粒，再于凝膠面上澆注%瓊脂糖2ml～3ml，冷卻凝固后，取出玻璃珠，使凝膠形成凹孔。

（3）將普通濾紙剪成2×3cm大小，3～4層重疊。用小刀將帶有凹孔的瓊脂糖切成小塊,每塊帶有一個(gè)凹孔,平放在濾紙上。

（4）在凹孔內(nèi)，加入制備好的含病毒的免疫復(fù)合物懸液。

（5）將電鏡載網(wǎng)的Fomnvar膜面向下倒懸于液滴上。由于瓊脂糖的吸水作用，20min～30min后，可將液滴的水分吸干，而濃縮的免疫復(fù)合物則粘附在載網(wǎng)膜上。

（6）在載網(wǎng)膜上滴加3%磷鎢酸負(fù)染20Sec，過量的負(fù)染液用濾紙?jiān)谳d網(wǎng)邊緣輕輕吸去。

（7）于透射電鏡4×04倍下觀察。ELISA試劑盒

結(jié)果判定

直接觀察病毒粒子的形態(tài)。由于離心濃縮的處理和特異性抗體的加入，大大提高了觀察的敏感性。