研究解析Hechs染色方法的實(shí)驗(yàn)步驟

．貼壁細(xì)胞

) 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用細(xì)胞培養(yǎng)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜，使約為50%-80%滿。

2) 刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5ml固定液，固定0分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間（可4℃過(guò)夜）。

3) 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

5) 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

6) 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細(xì)胞接觸封片液，切勿弄反。

7) 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

2. 懸浮細(xì)胞

) 離心收集細(xì)胞樣品于.5ml離心管內(nèi)，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細(xì)胞，固定0分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間（可4℃過(guò)夜）。

2) 離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)。

3) zui后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。

4) 稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。

5) 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。

6) 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

7) 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

8) H. 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

3. 組織切片

) 常規(guī)包埋切片后，脫蠟，透明。

2) PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。可在六孔板中操作。

3) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。

4) 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

5) 將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

6) 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。